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Das serumfrei anzuwendende definierte TNB 100 Medium wurde zur Kultivierung von Neuroblastoma x Glioma Hybridzellen (108 CC 15) optimiert. Um Rückmutationen dieser Hybridzellen zu verhindern, sollte TNB 100 Medium HAT Supplement in den üblichen Konzentrationen enthalten. Das gebrauchsfertige TNB 100 Medium lässt sich aus 2 ml des Lipid-Proteinkomplexes und 100 ml des TNB 100 Basalmediums herstellen.

Das Medium enthält keinen Trypsininhibitor. Zum Passagieren von Zellen muss nach dem Trypsinieren daher ausreichend gewaschen bzw. Trypsininhibitor zugesetzt werden. TNB 100 erfordert 37 °C, 10 % CO₂-Begasung und mindestens 90 % relative Luftfeuchtigkeit. Ein Mediumwechsel ist alle 48 h erforderlich.

TNB 100 Medium (ohne HAT) eignet sich für die Kultur primärer neuronaler Zellen von Maus, Huhn und Ratte. Es können aber auch nicht-neurale Zellen wie humane cytotoxische T-Zellen funktionsspezifisch getestet werden.

Abweichend von der Originalzusammensetzung werden wegen der Gefahr einer Photooxidation nur 0,05 mg/l Riboflavin eingesetzt.